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    克隆形成

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    項(xiàng)目介紹

    細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率,是測定單個(gè)細(xì)胞增殖能力的有效方法,指單個(gè)細(xì)胞在體外持續(xù)增殖6代以上其后所形成的細(xì)胞群,形成肉眼可見的克隆,通過計(jì)數(shù)得出克隆形成率,可對(duì)受檢細(xì)胞的增殖潛力作定量分析,可以反映細(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。常用方法有平板克隆形成和軟瓊脂克隆形成。常用于抗腫瘤藥物敏感性測定、基因治療、腫瘤放射生物學(xué)等方面的研究。

    樣品要求

    1、平板克隆形成試驗(yàn)方法簡單,適用于貼壁生長的細(xì)胞(細(xì)胞生長快慢均可)。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。

    2、軟瓊脂培養(yǎng)克隆形成試驗(yàn)適用于懸浮生長的細(xì)胞以及繁殖較快的貼壁細(xì)胞。

    3、請(qǐng)?zhí)顚懲暾蜆訂位蛱峁┰敿?xì)的實(shí)驗(yàn)方案。


    項(xiàng)目案列

    光學(xué)顯微鏡下的克隆細(xì)胞

    克隆形成原始圖

    常見問題

    克隆形成的目的?

    1)通過對(duì)細(xì)胞處理后在細(xì)胞培養(yǎng)板上的克隆形成能力來提示處理后細(xì)胞的增殖能力。

    2)評(píng)價(jià)不同殺傷因素(藥物、基因等)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖能力或群體依賴性的敏感性;

    3)評(píng)價(jià)細(xì)胞在體內(nèi)成瘤性,癌細(xì)胞不一定都可以在體內(nèi)成瘤,但若體外克隆能力越強(qiáng),即表明體內(nèi)成瘤性越強(qiáng),算是一種模擬體內(nèi)成瘤的體外實(shí)驗(yàn)。

    克隆形成的分類?

    克隆形成依據(jù)采用的培養(yǎng)介質(zhì)的不同,分為平板克隆和軟瓊脂克隆兩類。

    1. 平板克隆形成(Colony formation):細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中,應(yīng)用于貼壁的細(xì)胞。

    2. 軟瓊脂克隆形成(soft agar colony formation):細(xì)胞被瓊脂糖掛起來,主要應(yīng)用于懸浮的腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞系。

    2種細(xì)胞克隆方式,如何選擇?

    根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)象和目的選擇,平板克隆檢測貼壁腫瘤細(xì)胞的增殖能力和致瘤性,軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)除了檢測貼壁細(xì)胞,還能檢測懸浮腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞系,具有平板克隆不可取代的優(yōu)勢(shì)。若只是簡單評(píng)價(jià)貼壁細(xì)胞的增殖能力和群體依賴性,則選擇平板克隆即可。

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