国产成人午夜精品一区二区三区,成人3d动漫在线观看,老师露出两个奶球让我吃奶头,啦啦啦中文免费视频高清观看

Document

當(dāng)前位置：文庫百科 ? 文章詳情

【詳解】HE染色實驗中的常見問題及其處理方法

來源：時間：2024-12-06 10:23:25 瀏覽：7273次

【詳解】HE染色實驗中的常見問題及其處理方法

HE染色（蘇木精-伊紅染色）是組織學(xué)、胚胎學(xué)和病理學(xué)中最常用的技術(shù)之一，用于觀察細胞核和細胞質(zhì)的結(jié)構(gòu)；然而，在實際操作中，常常會遇到各種問題，影響染色結(jié)果的質(zhì)量。

一、基本原理

HE染色法利用蘇木精（堿性染料）和伊紅（酸性染料）分別對細胞核和細胞質(zhì)進行染色。蘇木精主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)和細胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍色，而伊紅則使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。通過這種染色方法，可以清晰地觀察到細胞的結(jié)構(gòu)和組織的形態(tài)。

二、常見問題及處理方法

（1）著色過深或過淺

1. 原因：染色時間控制不佳，HE染色需要通過鏡檢來控制時間，染色時間過長或過短都會影響染色效果；分化時間不當(dāng)，過度分化會導(dǎo)致染色太淺，而分化不足則會使染色過深。

2. 處理方法：通過預(yù)實驗確定最佳染色時間，一般情況下新鮮蘇木素染色時間在1-3分鐘，分化時間不宜過長；如果染色過深，可以適當(dāng)縮短蘇木素染色時間，或增加分化時間；如果染色過淺，可以適當(dāng)延長蘇木素染色時間，或減少分化時間；過度分化后，可以用水洗后重新復(fù)染蘇木素。

（2）染色不均

1. 原因：切片厚度不一，切片有褶皺或裂痕，導(dǎo)致過厚或過薄的部分在染色時吸收染液的程度不同；染色時間不足或過長；脫蠟水化不充分；試劑分布不均勻。

2. 處理方法：提高切片技術(shù)，確保切片厚度均勻，厚度一般在3-5微米，切片過程中避免產(chǎn)生刀痕和褶皺；嚴格按照標(biāo)準時間進行染色；脫蠟前確保玻片干透，嚴格按照標(biāo)準時間把控二甲苯停留時間（二甲苯110分鐘、二甲苯110分鐘）；在染色過程中適當(dāng)晃動切片，確保試劑均勻分布。

（3）染色后切片不清晰，霧化，斑點

1. 原因：烤片溫度過低，時間不夠，導(dǎo)致脫蠟不徹底，切片留存白色斑點；染色后切片脫水時間不合理，切片上殘留水分，使切片霧化；蓋玻片上殘留封固劑，導(dǎo)致切片不清晰；組織標(biāo)本已發(fā)生自溶或取材后沒及時固定或固定液濃度不夠；固定劑對組織有一定媒染作用，固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因；淋巴結(jié)處理不當(dāng)造成切片染色后組織見發(fā)灰現(xiàn)象，主要原因是細胞密集，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，導(dǎo)致固定液難以滲透到組織深部。

2. 處理方法：提高烤片溫度和時間，確保脫蠟徹底；優(yōu)化脫水的梯度乙醇時間，切片經(jīng)過低濃度時時間要短，向高濃度逐漸延長脫水時間；重新封片，確保蓋玻片上沒有殘留封固劑；及時固定組織標(biāo)本，確保固定液濃度合適；對于淋巴結(jié)等復(fù)雜組織，可以用等量無水乙醇乙醚混合液處理切片5-10分鐘，乙醇洗，水洗，3%硫酸鐵銨溶液補充媒染5分鐘。

（4）染色后切片有黑色雜質(zhì)，氣泡

1. 原因：雜質(zhì)多為蘇木素染色液中的金屬膜粘附于載玻片上；封片過程中產(chǎn)生的氣泡。

2. 處理方法：每天染色前仔細過濾蘇木素染液，或使用半氧化蘇木素染色液；仔細檢查封片過程，確保沒有氣泡產(chǎn)生?？梢允褂弥行詷渲M行封片，防止日后褪色。

（5）細胞核染色過淺

1. 原因：蘇木精染色時間不足，未能使細胞核充分攝取染料；分化時間過長，導(dǎo)致細胞核染色過淺。

2. 處理方法：適當(dāng)延長蘇木精染色時間，確保細胞核充分染色；減少分化時間，避免過度分化。

（6）細胞質(zhì)染色不佳

1. 原因：伊紅染色時間不足，未能使細胞質(zhì)充分攝取染料；伊紅染色液中的pH值不合適。

2. 處理方法：適當(dāng)延長伊紅染色時間，確保細胞質(zhì)充分染色；在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸，調(diào)節(jié)pH值，改善細胞質(zhì)染色效果。

（7）組織切片收縮、變形

1. 原因：染色過程中切片干燥：導(dǎo)致切片收縮、變形，影響神經(jīng)元形態(tài)。

2. 處理方法：在染色過程中保持切片濕潤，避免切片干燥；切片從二甲苯取出或進入二甲苯前，切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。

（8）封片問題

1. 原因：封片時使用的樹脂濃度不當(dāng)，可能導(dǎo)致日后褪色；蓋片選擇不當(dāng)，如漏出一部分組織塊，將會導(dǎo)致褪色。

2. 處理方法：使用中性樹脂進行封片，防止日后褪色；選擇大于組織塊面積的蓋片，確保沒有部分組織塊漏出；確保樹脂濃度適中，封片時沒有氣泡。

三、實驗注意事項

1. 緩沖液的使用：組織切片在染色前必須在適當(dāng)?shù)木彌_液中浸泡，染色期間pH值應(yīng)始終穩(wěn)定。

2. 固定時間：如果組織塊在福爾馬林中固定時間長，組織酸化而影響細胞核著色，需要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30分鐘。

3. 分色時間：切片染蘇木精后，分色這一步是關(guān)鍵，應(yīng)在顯微鏡下控制進行，一般以細胞核染色清楚而細胞質(zhì)基本無色為佳。

4. 脫水和透明化：組織切片需要通過一系列的酒精濃度逐漸脫水，并用透明劑如苯酚、二甲苯等進行透明化；透明化后切片會變得更加清晰，便于染色。

5. 洗滌步驟：未充分清洗會導(dǎo)致染色劑殘留，影響結(jié)果的質(zhì)量；每個處理步驟后，應(yīng)該用足夠的緩沖鹽水徹底洗滌。

6. 避免空氣暴露：空氣中的灰塵和污染物會對實驗產(chǎn)生不利影響，因此在染色過程中，需要避免將切片長時間暴露在空氣中，并保持實驗室的清潔和衛(wèi)生。

7. 監(jiān)控染色反應(yīng)：染色的過程應(yīng)該密切監(jiān)測，以便在必要時進行微調(diào)；需要管理好每個步驟的時間和溫度，以避免過度染色或染色不足的情況發(fā)生。

上一篇：電子探針顯微分析的結(jié)構(gòu)特點及分析方法

下一篇：研究金屬材料熱疲勞行為的gleeble熱模擬實驗

相關(guān)文章

一文詳解掃描電子顯微鏡(SEM)的工作原理及應(yīng)用技術(shù)

2023-10-08

熱重分析（TG-DTG）曲線的幾種解析方法

2023-12-26

接觸角測試（CA）的原理、樣品制備要求及實際應(yīng)用

2023-11-16

一文詳細介紹he染色的基本原理、實驗步驟及注意事項

2023-11-23

恒電流間歇滴定法GITT的基本原理以及測試教程

2022-08-12

TMA技術(shù)的基本概念、應(yīng)用領(lǐng)域以及實際操作中的要點

2023-12-06

項目推薦/Project

HE染色

舉報有獎

TEL: 191-3608-6524

如：在網(wǎng)絡(luò)上惡意使用“測試狗”等相關(guān)關(guān)鍵詞誤導(dǎo)用戶點擊、惡意盜用測試狗商標(biāo)、冒稱官方工作人員等情形，請您向我們舉報，經(jīng)查實后，我們將給予您獎勵。

舉報內(nèi)容：

200

上傳附件：

文件格式不正確，請重新上傳文件格式不正確，請重新上傳文件格式不正確，請重新上傳

文件格式：jpg、jpeg、png、gif、tif、doc、docx、ppt、pptx、xls、xlsx、pdf、zip、rar

聯(lián)系方式

姓名

電話

提交意見

意見反饋

Suggestions

您可以在此留下您寶貴的意見，您的意見或問題反饋將會成為我們不斷改進的動力。

意見類型

測試服務(wù)

網(wǎng)站功能

財務(wù)報賬

其他類型

意見內(nèi)容

200

聯(lián)系方式

姓名

電話

提交意見

国产成人午夜精品一区二区三区,成 人3d动漫在线观看,老师露出两个奶球让我吃奶头,啦啦啦中文免费视频高清观看

項目推薦

舉報有獎

意見反饋

国产成人午夜精品一区二区三区,成人3d动漫在线观看,老师露出两个奶球让我吃奶头,啦啦啦中文免费视频高清观看